人猪流感(H1N1)病例标本采集和实验室检测指南
猪流行性感冒( h1n1病毒)病毒的检测
所有猪流行性感冒( h1n1病毒)疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测猪流行性感冒( h1n1病毒)的病毒。
推荐采集的呼吸道标本:
疾病发病后应尽快采集如下标本:鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本,可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液( vtm ) ,并立即用冰块或冰排保存或置于4 ℃ (冰箱),并马上运送至实验室。临床样品收集人员及实验室人员的感染控制指导请见相关文件。
拭子
理想的情况下,标本应使用头部为合成纤维的拭子(例如,聚酯纤维 ),用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液(例如,含有蛋白质稳定剂,阻止细菌和真菌生长的抗生素,缓冲液) 。
临床标本储存
所有呼吸道标本应保存在4℃ ,并尽快放置在-70℃。如果没有-70℃度冰箱,标本应保存在4℃ ,但不应超过4天。
临床标本运输
临床标本应按照a类包装要求运送,并用干冰运输。
所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。
检测程序
呼吸道标本应首先应用real time rt-pcr方法检测a型流感病毒的m基因、swine( h1n1)的ha基因和np基因,以及质控对照rnp基因。同时,接种mdck细胞或spf鸡胚进行病毒分离,并测定病毒的全基因组序列。
推荐的检测方法
用real-time rt-pcr方法检测猪流行性感冒( h1n1病毒)病毒。
其他检测方法
快速流感抗原检测
一些商用快速检测可以区分a和b型流感病毒 。快速检测实验a型流感阳性的病例符合可能病例的标准(见上文) 。这些实验对检测人感染猪流行性感冒( h1n1病毒)病毒临床标本的敏感性和特异性未知,而且检测季节性流感病毒的灵敏度不佳。因此,快速检测阴性结果可能是假阴性,不能作为猪流感感染的最后诊断。
免疫荧光法(或装配的ifa )
免疫荧光试验可以区分a和b型流感病毒 。检测a型流感阳性的病例符合可能病例的标准(见上文)。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量,操作技能,对检测人感染猪流行性感冒( h1n1病毒)病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此,免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性,不能作为猪流感感染的最后诊断。
病毒培养
可用mdck细胞和spf鸡胚分离猪流感( h1n1病毒)病毒可以诊断感染,但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排除感染猪流感( h1n1病毒)病毒。
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